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Test de Expresión y Purificación de Proteínas en E. coli

  • Mediante este primer servicio de expresión y purificación el cliente obtiene toda la información necesaria sobre los datos relevantes para expresar y purificar su proteína, tales como nivel de expresión, solubilidad, rendimiento de la purificación, etc. Estos datos son imprescindibles para calcular el volumen de cultivo necesario para producir la cantidad deseada de proteína.

    El servicio, como norma general, utiliza el sistema de expresión CASCADETM así como la purificación por cromatografía de afinidad utilizando los tags propios de Biomedal, LYTAG y C-LYTAG, ambos incluidos en los vectores de expresión del catálogo Biomedal y los reactivos asociados. Si el cliente dispone de una construcción con un sistema de expresión diferente y está interesado en analizar el rendimiento inicial de ésta, podemos ofertar este servicio adaptado a sus necesidades concretas.

  • El cliente aporta:

    Fragmento de ADN clonado en uno de los vectores del catálogo Biomedal. Biomedal le enviará el vector de su elección junto con los primers necesarios para su secuenciación de manera GRATUITA.
    Información disponible sobre la proteína diana relevante para el proyecto.

    El servicio incluye:

    • Transformación del plásmido con el inserto de ADN codificante de la proteína problema en la cepa E. coli REG-12.
    • Cultivo en pequeño volumen e inducción con salicilato.
    • Lisis con PROLYSE Protein Extraction Solution, de Biomedal, y obtención de la fracción soluble.
    • Purificación con Spin-columns.
    • Análisis de los resultados mediante SDS-PAGE y Coomassie.
    • Análisis de los resultados por Western blot utilizando un anticuerpo anti-tag específico (*).
    • Cuantificación de la proteína purificada.
    • Elaboración de un informe técnico final, incluyendo fotografía de la SDS-PAGE resultante, conclusiones y recomendaciones.

     

    Con la información obtenida del Test de Expresión y Purificación se obtienen datos tales como: nivel de expresión, solubilidad, rendimiento de la purificación, etc. Estos datos permiten diseñar una estrategia de purificación específica y calcular el volumen de cultivo necesario para obtener la cantidad de proteína heteróloga deseada. Además, estos mismos datos permiten definir el proceso de optimización más adecuado que permita incrementar el rendimiento, pureza, solubilidad, etc. de la proteína del cliente.

    • Servicio de Síntesis de Oligonucleótidos: diseño de primers específicos del inserto para su secuenciación.
    • Servicio de Clonación Génica: clonación del fragmento de ADN del cliente en el vector elegido.
    • Servicio de Secuenciación: secuenciación del plásmido con el inserto de ADN problema para verificar que el fragmento está correctamente clonado y la fase de lectura es la adecuada.
    • Servicio de análisis por Western Blot: para aquellos casos en los que aún observándose proteína purificada en el gel SDS-PAGE, el cliente está interesado en obtener datos adicionales para diseñar la optimización.

     

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    En caso de que quiera realizar un pedido directamente, por favor, indíquenos aquí los servicios que desea:

    SE-3338 Test de Expresión y Purificación de Proteínas en E. coli

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