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Optimización de Expresión y Purificación de Proteínas en E. coli

  • Biomedal, a través de este servicio, ofrece la posibilidad de optimizar diversos factores relativos a la expresión y purificación de proteínas, tales como: nivel de expresión, solubilidad, nivel de pureza, rendimiento de la purificación, etc.

    Tanto los datos obtenidos en el análisis Western blot, realizado al producto anterior Test de Expresión y Purificación, como los datos aportados por el cliente, si se incorpora de novo a este servicio, son la base fundamental con la que se diseñará la estrategia de optimización apropiada.

    Este servicio de optimización está compuesto de 4 módulos claramente diferenciados, diseñados para cubrir todas las necesidades del cliente y los diferentes escenarios que se pueden plantear según el tipo de proteína: cepas especializadas, condiciones de inducción, purificación a partir de cuerpos de inclusión y purificación específica.

    (*) Servicio complementario realizado sólo si el cliente lo especifica; o para casos donde no se observe proteína purificada en el gel SDS-PAGE.

     

    Optimización con Cepas Especializadas:
    Este módulo está diseñado para corregir problemas de expresión relacionados con el metabolismo de las cepas hospedadoras. El servicio consiste en la realización de pruebas de expresión y purificación en dos cepas de E. coli modificadas genéticamente, alternativas a nuestra cepa estándar E. coli REG-12, que aportan dos ventajas claras para la expresión de proteínas:

    • Mejor nivel de expresión para el caso de proteínas periplásmicas y/o de membrana.
    • Optimización del sesgo de codones debidos a ADNc de origen no bacteriano.

     

    El cliente recibirá en el informe técnico el grado de expresión y purificación obtenido con cada cepa especializada, facilitando su elección de la cepa a utilizar durante el escalado y previniendo las dificultades asociadas a la expresión de su proteína problema en E. coli.

     

    Optimización de las Condiciones de Inducción:
    Este módulo permite analizar diez condiciones de inducción diferentes para la expresión y purificación de la proteína problema. De esta forma, el cliente recibirá, a través del informe técnico, todos los resultados de expresión y purificación de los diferentes experimentos de inducción obtenidos con su proteína problema.

     

    Optimización por Purificación a partir de Cuerpos de Inclusión:
    Mediante la Optimización a partir de Cuerpos de Inclusión, Biomedal pone a punto el proceso de purificación de aquellas proteínas altamente insolubles y que forman cuerpos de inclusión. El cliente recibirá el protocolo más adecuado para dicha purificación en el informe técnico, conjuntamente al resultado cuantitativo obtenido.

     

    Optimización por Purificación Específica:
    Este último módulo de optimización es quizá el más abierto a las necesidades concretas del cliente en relación a aspectos concretos de la purificación, tales como purificación a un nivel de pureza determinado (Biomedal garantiza una pureza de entre el 80-90% en sus purificaciones estándar), purificación con técnicas alternativas a la cromatografía de afinidad, purificación por tag específico, etc.

  • Optimización con Cepas Especializadas:

    El cliente aporta (*):

    • Fragmento de ADN clonado en uno de los vectores del catálogo Biomedal. Biomedal le enviará el vector de su elección junto con los primers necesarios para su secuenciación de manera GRATUITA.
    • Secuencia de la construcción con el fragmento de ADN clonado.

     

    El servicio ofrece:

    • Transformación del plásmido con el inserto de ADN codificante de la proteína problema en dos cepas E. coli modificadas genéticamente, alternativas a nuestra cepa estándar E. coli REG-12.
    • Dos cultivos paralelos (uno por cepa) en pequeño volumen e inducción con salicilato.
    • Lisis con PROLYSE Protein Extraction Solution, de Biomedal, y obtención de la fracción soluble.
    • Purificación con Spin-columns.
    • Análisis de los resultados mediante SDS-PAGE y Coomassie.
    • Análisis de los resultados por análisis Western blot utilizando un anticuerpo anti-tag específico.
    • Cuantificación de la proteína purificada.
    • Elaboración de informe técnico final, incluyendo fotografía de la SDS-PAGE resultante, conclusiones y recomendaciones para el proceso de obtención de la cantidad deseada de proteína.

     

    (*) Estos requerimientos solo son necesarios si el cliente se incorpora a este servicio sin haber realizado previamente nuestro primer servicio de Test de Expresión y Purificación de Proteínas.

     

    Optimización de las Condiciones de Inducción:

    El cliente aporta (*):

    • Fragmento de ADN clonado en uno de los vectores del catálogo Biomedal. Biomedal le enviará el vector de su elección junto con los primers necesarios para su secuenciación de manera GRATUITA.
    • Secuencia de la construcción con el fragmento de ADN clonado.

     

    El servicio ofrece:

    • Diseño de la estrategia de optimización más adecuada a cada proteína específica.
    • Transformación del plásmido con el inserto de ADN codificante de la proteína problema en la cepa E. coli REG-12.
    • Cultivos en pequeño volumen con 10 condiciones de inducción diferentes.
    • Lisis con PROLYSE Protein Extraction Solution, de Biomedal, y obtención de la fracción soluble.
    • Purificación con Spin-columns.
    • Análisis de los resultados mediante SDS-PAGE y Coomassie.
    • Análisis de los resultados por Western blot utilizando un anticuerpo anti-tag específico.
    • Cuantificación de la proteína purificada.
    • Elaboración de informe técnico final, incluyendo fotografía de la SDS-PAGE resultante, conclusiones y recomendaciones para el proceso de obtención de la cantidad deseada de proteína.

     

    (*) Estos requerimientos solo con necesarios si el cliente se incorpora a este servicio sin haber realizado previamente nuestro primer servicio de Test de Expresión y Purificación de Proteínas.

     

    Optimización por Purificación a partir de Cuerpos de Inclusión:

    El cliente aporta (*):

    • Fragmento de ADN clonado en uno de los vectores del catálogo Biomedal. Biomedal le enviará el vector de su elección junto con los primers necesarios para su secuenciación de manera GRATUITA.
    • Secuencia de la construcción con el fragmento de ADN clonado.

     

    El servicio ofrece:

    • Diseño de la estrategia de optimización más adecuada a cada proteína específica.
    • Transformación del plásmido con el inserto de ADN codificante de la proteína problema en la cepa E. coli REG-12.
    • Cultivos en pequeño volumen e inducción con salicilato.
    • Lisis con PROLYSE Protein Extraction Solution, de Biomedal, obtención de la fracción soluble y solubilización de los cuerpos de inclusión**.
    • Purificación con resina específica**.
    • Análisis de los resultados mediante SDS-PAGE y Coomassie.
    • Análisis de los resultados por Western blot utilizando un anticuerpo anti-tag específico.
    • Cuantificación de la proteína purificada.
    • Elaboración de informe técnico final, incluyendo fotografía de la SDS-PAGE resultante, conclusiones y recomendaciones para el proceso de obtención de la cantidad deseada de proteína.

     

    (*) Estos requerimientos solo son necesarios si el cliente se incorpora a este servicio sin haber realizado previamente nuestro primer servicio de Test de Expresión y Purificación de Proteínas.
    (**) Modificaciones del protocolo estándar según las características de cada proteína concreta.

     

    Optimización por Purificación Específica

    El cliente aporta (*):

    • Fragmento de ADN clonado en uno de los vectores del catálogo Biomedal. Biomedal le enviará el vector de su elección junto con los primers necesarios para su secuenciación de manera GRATUITA.
    • Secuencia de la construcción con el fragmento de ADN clonado.

     

    El servicio ofrece:

    • Diseño de la estrategia de optimización más adecuada a cada proteína específica.
    • Transformación del plásmido con el inserto de ADN codificante de la proteína problema en la cepa E. coli REG-12.
    • Cultivos en pequeño volumen e inducción con salicilato.
    • Lisis con PROLYSE Protein Extraction Solution, de Biomedal y obtención de la fracción soluble**.
    • Purificación con resina específica**.
    • Análisis de los resultados mediante SDS-PAGE y Coomassie.
    • Análisis de los resultados por Western blot utilizando anticuerpo anti-tag específico.
    • Cuantificación de la proteína purificada.
    • Elaboración de informe técnico final, incluyendo fotografía de la SDS-PAGE resultante, conclusiones y recomendaciones para el proceso de obtención de la cantidad deseada de proteína.

     

    (*) Estos requerimientos solo son necesarios si el cliente se incorpora a este servicio sin haber realizado previamente nuestro primer servicio de Test de Expresión y Purificación de Proteínas.
    (**) Modificaciones del protocolo estándar según las características de cada proteína concreta.

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    SE-4646 Optimización con Cepas EspecializadasSE-4647 Optimización de las Condiciones de InducciónSE-4648 Optimización por Purificación a partir de Cuerpos de InclusiónSE-4649 Optimization por Purificación Específica

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