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Transposones de Expresión Condicional

  • Sistema pUT mini-Tn5

    Los mini-Tn5 son elementos móviles capaces de transponerse desde un plásmido al cromosoma bacteriano. La actividad transposasa necesaria está codificada por el gen tnp*, presente en cis en el plásmido aunque externo al elemento mini-Tn5. Los vectores pUT mini-Tn5 son utilizados para insertar fragmentos de ADN en el cromosoma bacteriano, clonando previamente dichos fragmentos dentro de la región mini-Tn5. Debido a la pérdida del gen tnp* después de la inserción, los minitransposones son integrados en el cromosoma y heredados de manera estable. Los diferentes vectores pUT mini-Tn5 pueden utilizarse en inserciones secuenciales, siendo posible la construcción de cepas con distintos fragmentos integrados.

     

    Ventajas:

    • Inserción fácil y estable del ADN heterólogo en el cromosoma de la cepa de interés, después de unas simples manipulaciones genéticas.
    • Amplio rango del tamaño del fragmento insertado.
    • Posibilidad de múltiples inserciones en una misma cepa.
    • Easy modification of the cloning vector.
    • Uso de dianas para enzimas de restricción de corte poco frecuente como NotI y SfiI.
    • Amplio rango de cepas receptoras Gram negativas.

     

    Algunas de las aplicaciones más comunes de los vectores pUT mini-Tn5 son:

    • Clonación e inserción estable del fragmento clonado.
    • Mutagénesis insercional.
    • Ensayos con promotores.
    • Generación de fenotipos condicionales y mutaciones no polares.
    • Análisis de terminadores transcripcionales.
    • Aplicaciones medioambientales: etiquetado con genes marcadores para la monitorización de puesta en libertad de microorganismos y/o regulación transcripcional en el medio ambiente.
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